| Objetivo : | |
| a) Reconocer los principales síntomas de enfermedades producidas por bacterias fitopatógenas, b) Familiarizarse con el uso de una clave rápida para identificar bacterias fitopatógenas aisladas de tejido vegetal enfermo. c) conocer los métodos utilizados para el aislamiento de bacterias fitopatógenas a partir de material vegetal enfermo. d) Comprender el proceso de diagnóstico de una enfermedad bacteriana. e) Conocer en que consiste y que utilidad tiene en el proceso de diagnóstico la prueba de hipersensibilidad en no huesped. | |
| Metodología : | |
| TRABAJO GRUPAL |
| Describa la sintomatología que presentan las plantas en fresco, que se encuentran sobre las mesadas, mirando la muestra con luz incidente y a trasluz. | |
| Observe la presencia de signo. Para cada muestra, discuta la facilidad de realizar el aislamiento de la bacteria fitopatógena. |
| Agallas o tumores | |
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| Agallas o tumores en raíces de frambuesa provocados por Agrobacterium tumesfasiens. | Agallas o tumores en raíces de frambuesa provocados por Agrobacterium tumesfasiens. |
| Manchas foliares | |
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| Mancha en "V" en hoja de repollo ocasionada porXanthomonas campestris. |
Mancha foliar en hoja de zapallo ocasionada porXanthomonas campestris pv cucurbitae
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| Mancha bacteriana en hoja de tomate. | Manchas en hojas de duraznero provocadas por Xanthomonas arboricola pv pruni. Observese la distribución sobre la nervadura y parte inferior de la hoja en coincidencia con los lugares en que se acumula el agua de lluvia. |
| Costras en frutos | |
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Costras en fruto de tomate
| Costras en frutos de tomate. |
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Costras en fruto de Morrón.
| Costras en fruto de morrón. |
| Manchas necróticas en tallo |
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| Manchas necróticas en tallo de tomate. |
| Lesiones en frutos | |
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| Lesión en fruto de zapallo Kabutiá | Corte del fruto para observar las lesiones. Observese el avance en profundidad de aspecto acuoso |
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| Lesiones en fruto de ciruelo ocasionadas por Xanthomonas arboricola pv pruni. | Lesiones en fruto de durazno ocasionadas porXanthomonas arboricola pv pruni. |
| Pudredumbres húmedas | |
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| Podredumbre húmeda en hojas de cebolla | Podredumbre basal de la planta de papa ocasionada porErwinia. |
| Signos de las bacterias (Zoogleas) | |
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| Zooglea saliendo de los haces vasculares de una papa afectada por Pseudomonas solanacearum. | Zooglea saliendo de los haces vasculares de una planta de tomate afectada. |
| Técnicas utilizadas para observar el signo de las bacterias. |
Test de Flujo: Se utiliza en el caso de bacterias vasculares. Un trozo del tallo supuestamente atacado por alguna bacteria vascular es cortado y se coloca suspendido en un vaso de agua. En este caso las bacterias (zooglea) fluye (se descarga) hacia al agua. Se observa a simple vista.
Microcorrida:
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Test de flujo:
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| Un trozo de una mancha foliar colocado bajo el microscopio permite observar el flujo bacteriano. (desde el tejido vegetal fluye con apariencia de nube hacia el agua) | Un trozo de tallo de tomate sumergido en un vaso de agua permite observar el flujo bacteriano. |
| 1) En el cabín de diapositivas se ilustra el aislamiento e identificación de una bacteria que causa podredumbre en zapallo cabutiá. A partir de los resultados que observa en los test bioquímicos y con ayuda de la "Clave abreviada de identificación de bacterias" (anexo 2, Guía para las clases prácticas)indique a que Género pertenece la bacteria causante de la podredumbre. |
 | Esquema simplificado para la identificación de bacterias fitopatógenas a nivel de Género |
2) Se muestran distintas bacterias (cultivos puros) aisladas de plantas de tomates, cuyo síntoma en hojas se observa en la fotografía presentada y plantas de tabaco en las que se realizó una prueba de hipersensibilidad de las mismas bacterias.
a) Describa los siguientes ítem para cada una :
| forma y tama�o | ||
| 1 | Borde | |
| Elevaci�n | ||
| Color | ||
| forma y tama�o | ||
| 2 | Borde | |
| Elevaci�n | ||
| Color | ||
| forma y tama�o | ||
| 3 | Borde | |
| Elevaci�n | ||
| Color | ||
| forma y tama�o | ||
| 4 | Borde | |
| Elevaci�n | ||
| Color | ||
| forma y tama�o | ||
| 5 | Borde | |
| Elevaci�n | ||
| Color |
Fig. 5 Morfología de colonias de algunas bacterias fitopatógenas.
| Coloración | |||
| Elevación | |||
| Borde | |||
De Harrigan, W.F. y Cance M.E Laboratory methods in microbiology. 1996.
b) Con esta información ¿es posible identificar la bacteria causal de la enfermedad observada? ¿qué pasos seguiría para identificarla?
Preguntas
¿Qué tipo de organismos son las bacterias?
¿Qué características tienen las bacterias fitopatógenas?
¿Cuáles son los síntomas más característicos de las enfermedades bacterianas?
¿Qué signo presentan las enfermedades bacterianas?
¿En qué consiste y qué utilidad práctica tiene el llamado "test de flujo"?
¿En qué consiste y qué utilidad práctica tiene el llamado "test de hipersensibilidad"?
¿En base a qué elementos se realiza la clasificación taxonómica de las bacterias fitopatógenas?
Desde el punto de vista agronómico: ¿qué características de una enfermedad bacteriana le interesaría conocer?
Problemas
1.- Muestras de bulbos de cebolla dulce, llegaron al laboratorio presentando pudrición blanda de las catáfilas internas. Se procedió al aislamiento y se obtuvo una bacteria a la cual se le realizó la prueba de patogenicidad reproduciendo los síntomas al inocularse trozos de bulbos sanos. Se inocularon plantas de tabaco con el propósito de comprobar la reacción de hipersensibilidad; y se observó rápida necrosis en los tejidos de la zona infiltrada con la suspensión bacteriana.
Con el propósito de identificar a la bacteria problema se realizaron las siguientes pruebas bioquímicas y fisiológicas:
- Coloración de Gram, resultando ser Gram negativa.
- Siembra sobre el medio agar-levadura-dextrosa-CaCO3 las colonias obtenidas no presentaron coloración amarilla.
- Siembra sobre medio B de King no observándose producción de pigmentos fluorescentes.
- Test de Hugh & Leifson's (O/F), es anaerobia facultativa (reacción oxidativa)
De acuerdo con la bibliografía consultada los bulbos de cebolla son afectados por pudriciones blandas ocasionadas por Erwinia y Pseudomonas.
En base a los resultados obtenidos ¿qué género de bacterias estará causando el problema estudiado?
2.- A partir de órganos de reserva de una hortaliza que presentaban síntomas de pudrición húmeda se aisló y purificó una bacteria en el laboratorio. Se comprobó su patogenicidad en órganos de reserva. Al ser inoculada en tabaco dió una reacción hipersensible.
a).- ¿Qué géneros de los mencionados abajo descartaría según los datos indicados?
b).- ¿Qué prueba(s) realizaría sobre el patógeno aislado para determinar a cuál de los restantes géneros pertenece?
- Bacillus
- Xanthomonas
- Erwinia
- Corynebacterium
- Pseudomonas
- Streptomyces
3.- Un cultivo de poroto desarrollado en un verano cálido y con muchas precipitaciones, presentó los siguientes síntomas:
manchas necróticas, pequeñas, angulosas, de aproximadamente 3 mm de diámetro, rodeadas de un halo ancho de color verde pálido; dichas manchas aparecían tanto en hojas, como tallos, vainas y semillas, y su tamaño, forma y disposición variaban de acuerdo al órgano de la planta sobre el que se desarrollaban. Sobre esas lesiones, a veces, se presentaba un exudado de color blanco-grisáceo.
Este cultivo fue cosechado y la semilla obtenida se sembró al año siguiente en el mismo lugar de la chacra que el año anterior.
De acuerdo a los datos suministrados responda las siguientes preguntas:
a).- ¿Cuál cree Ud. que sea el factor patogénico responsable de esta sintomatología y en qué se fundamenta para dicha afirmación-?
b).- ¿Cuales pasos realizaría par aislar a dicho patógeno en cultivo puro y demostrar su patogenicidad?. Fundamente su respuesta.
c).- ¿En donde cree Ud. que este patógeno persiste de una estación de crecimiento a la siguiente?. Fundamente su respuesta.
d).- ¿Considera Ud. que el productor debió considerar algún tipo de medida de control al haber sembrado la segunda vez? -¿por qué? ¿cuáles serían dichas medidas?. Fundamente su respuesta.
4.- Se pretende autorizar la entrada al país de una partida de papa semilla.
Se extrae una muestra para ser inspeccionada y al cortar los tubérculos se observaron necrosis vasculares de donde, al presionar, fluye un exudado mucoso de color blancuzco. En el laboratorio estatal encargado de realizar las pruebas necesarias para comprobar su buena sanidad, se logra aislar una bacteria. Se sabe que existen dos enfermedades a bacterias en papa que presentan esta sintomatología, una de ellas es causada por una especie del género Pseudomonas y la otra por una especie de Corynebacterium.
a).- A los efectos de una primera aproximación que permita diferenciar entre los dos géneros mencionados. ¿Qué prueba rápida podría llevarse a cabo?
b).- ¿Cree Ud. que esa prueba es totalmente concluyente para un diagnóstico definitivo? Si Ud. cree que no lo es, ¿qué pasos deberían cumplirse para lograr su identificación?
5.- En nuestro laboratorio de diagnóstico se recibe una bolsa de plástico con una muestra que consiste de hojas de naranjo. Dicha muestra no se encuentra en muy buen estado y por lo tanto, los síntomas que se observan no son muy claros. Cuando se procede al aislamiento se aísla un hongo y una bacteria.
a).- Para el caso de la bacteria, ¿qué prueba/s deberá/n realizarse para demostrar su patogenicidad?
b).- ¿Qué opinión le merece las condiciones de envío de la muestra?
6.- A la clínica de diagnóstico llega una muestra de plantas de trigo con síntomas de estrías en las hojas y vainas; dichas estrías son relativamente cortas, translúcidas, de aspecto húmedo, encontrándose limitadas por las nervaduras. La muestra es analizada en forma simultánea por la sección de enfermedades a hongos y a bacterias.
¿Qué métodos de aislamiento podrían realizarse en la sección a bacterias?
7.- En el laboratorio se reciben tubérculos de papa con síntoma de pudrición blanda.
a).- ¿Qué método de aislamiento utilizaría con este tipo de muestra?
b).- ¿Qué pruebas podrían utilizarse parta demostrar la patogenicidad de la bacteria aislada?
8.- Aparece una nueva enfermedad bacteriana sobre naranjos que presenta síntomas en hojas, ramitas y frutos; en los tres órganos del árbol los síntomas son manchas.
Se sabe que la bacteria penetra por heridas y que la enfermedad aparece en dos zonas citrícolas, pero con mayor incidencia en una de ellas, donde el suelo es más arenoso y suelto, llueve más y los inviernos son más fríos y ventosos.
a).- ¿Cómo haría Ud. un cultivo puro de esta bacteria y como demostraría la relación de causalidad entre ella y su hospedante?. Explique.
b).- Mencione por lo menos tres condiciones predisponentes a esta enfermedad y en que se fundamenta para ello.
c).- ¿Qué medidas de tipo cultural se podrían tomar en un monte de naranjo ya afectado para disminuir la incidencia de esta enfermedad?
d).- ¿Cuál cree Ud. sea el principal daño ocasionado por esta enfermedad?
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